Extracción de Bandas mediante el kit "Concert(TM) Matrix Gel Extraction System" de Gibco BRL

1- Antes de cortar las bandas, pesar 2 tubos Eppendorf de 2,2 ml. En cada tubo introduciremos una de las dos mitades de la banda.

2- Tras cortar las bandas e introducirlas en los tubos, pesarlos y obtener el peso de cada media banda.

3- Añadir 3 volúmenes de L1 en cada Eppendorf, según el peso de cada media banda.

4- Calentar el baño a 50ºC e introducir los Eppendorf hasta que se funda la agarosa.

5- Añadir 13 μl de resina en cada Eppendorf.

6- Meter los Eppendorf en el baño a 50ºC durante 10 minutos, agitando los tubos cada 2 minutos y medio.

7- Dar un pulso a los Eppendorf a 13.200 rpm durante 30 seg.

8- Realizar 3 lavados (500 μl/lavado), resuspendiendo el pellet en cada uno de ellos: L1, L2 y L2. Precipitar los pellet mediante centrifugación a 13.200 rpm durante 30 seg en cada lavado.

9- Tras el último lavado, eliminar cualquier resto de L2 con la pipeta y sin tocar el pellet. Dejar los tubos al aire 10-15 min.

10- Añadir 100 μl de TE (el del kit) a cada Eppendorf. Resuspender el pellet y calentar a 50ºC durante 5 min.

11- Centrifugar los Eppendorf a 13.200 durante 2 minutos.

12- Pasar las dos mitades de la banda a un tubo Eppendorf de 1,5 ml.

13- Centrifugar los Eppendorf a 13.200 durante 2 minutos (por si quedan restos de resina).

14- Pasar el sobrenadante del Eppendorf a un tubo nuevo y añadir: 10 μl de TE, 20 μl de AcNa 3M pH 5.2 y 3 volúmenes de ETOH abs.

15- Precipitar el DNA a -20ºC.